DNA分子克隆技術(shù)是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)，其創(chuàng)新和發(fā)展直接推動(dòng)著分子生物學(xué)的進(jìn)步。目前國內(nèi)外使用的分子克隆方法有多種，各有優(yōu)缺點(diǎn)，分子克隆領(lǐng)域尚未形成一種標(biāo)準(zhǔn)化的方法，且試劑盒價(jià)格昂貴。中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究人員日前開發(fā)了一種新型的實(shí)用分子克隆技術(shù)Nimble Cloning(簡(jiǎn)稱NC克隆技術(shù))，能將目標(biāo)DNA通過一步反應(yīng)直接克隆到環(huán)狀目標(biāo)載體。
該技術(shù)論文近期發(fā)表在國際期刊《生物工程與生物技術(shù)前沿》(Frontiers in Bioengineering and Biotechnology)，中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物所言普副研究員和周鵬研究員為該文通訊作者。
言普介紹，NC克隆技術(shù)與現(xiàn)有分子克隆技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：一是直接將DNA克隆到環(huán)狀載體，避免了載體的線性化酶切和回收等步驟，不僅簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，還提高了克隆效率。二是使用靈活，用途廣泛。基因擴(kuò)增技術(shù)(PCR)產(chǎn)物和環(huán)狀質(zhì)粒上的DNA均可克隆到目標(biāo)載體，并且可用于單片段、多片段和多位點(diǎn)等多種形式的克隆。三是可靈活用于標(biāo)準(zhǔn)化克隆和無縫克隆?；蚣訋ㄓ媒宇^序列后可克隆到系統(tǒng)任何一個(gè)載體，形成一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的克隆系統(tǒng)。如有不使用通用接頭序列的無縫克隆要求，只需將目標(biāo)基因與載體的重疊序列設(shè)計(jì)在通用接頭的外圍，通用接頭可在克隆反應(yīng)中消除，在不改變載體的情況下實(shí)現(xiàn)無縫克隆。
為了方便NC克隆技術(shù)的推廣使用，言普等還構(gòu)建了一系列配套的系統(tǒng)表達(dá)載體，包括原核表達(dá)、酵母雙雜交、植物過表達(dá)、植物RNAi、植物亞細(xì)胞定位、植物BiFC、植物基因編輯、植物VIGS、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體等，初步形成了一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的克隆系統(tǒng)，為基因功能研究提供了一個(gè)便利的技術(shù)平臺(tái)。該套載體向科研人員開放共享，可免費(fèi)索取使用。
據(jù)悉，該技術(shù)已在中科院華南植物園、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)、東北林業(yè)大學(xué)、西北工業(yè)大學(xué)、揚(yáng)州大學(xué)、海南大學(xué)等10多家科研單位使用，取得了良好的使用效果，有望成為分子克隆領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)。(王祝華)
關(guān)鍵詞： 克隆技術(shù)
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